注意事項:
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:熱帶利什曼原蟲PCR檢測試劑盒多少錢
英文名稱:Leishmania tropicaPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
熱帶利什曼原蟲PCR檢測試劑盒多少錢原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
D-天冬酰胺一水物/D-天冬素/D-天門冬酰胺一水合物/D-Asparagine MonohydrateBR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,2058-58-4RT
D-谷氨酰胺/D-谷氨酸-5-酰胺/D-氨羰基丁氨酸/D-麩氨酰胺/D-GlutamineBR,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,5959-95-5RT
D-焦谷氨酸/(R)-2-吡咯烷酮-5-羧酸/D-Pyroglutamic acidBR,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,4042-36-8RT
D-賴氨酸/D-LysineBR,96%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,923-27-3RT
L-脯氨酰胺/L-ProlinamideBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7531-52-4RT
D-脯氨酰胺/D-ProlinamideBR,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,62937-45-5RT
BOC-L-苯丙氨醇/(S)-(-)-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-丙醇/N-Boc-L-苯丙氨醇/N-BOC-L-氨基丙醇/N-叔丁氧甲?;?L-苯丙氨醇/N-(叔丁氧羰基)-L-苯丙氨醇/Boc-L-PhenylalaninolBR,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,66605-57-0RT
BOC-L-丙氨醇/N-叔丁氧羰基-L-丙氨醇/Boc-L-alaninolBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,79069-13-9RT
BOC-L-脯氨醇/N-叔丁氧羰基-L-脯氨醇/(S)-(-)-1-叔丁氧羰基-2-吡咯烷甲醇/N-Boc-L-脯氨酸醇/BOC-L-ProlinolBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,69610-40-8RT
L-別蘇氨酸/(2S,3S)-2-氨基-3-羥基丁酸/L-allo-ThreonineBR,99%250毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,28954-12-3RT
肌氨酸乙酯鹽酸鹽/N-甲基氨基乙酸乙酯鹽酸鹽/Sarcosine ethyl ester HC1BR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,52605-49-9RT
肌氨酸甲酯鹽酸鹽/N-甲基氨基乙酸甲酯鹽酸鹽/Sarcosine methyl ester HC1BR,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13515-93-0RT
L-甲基多巴/3-羥基-α-甲基-L-酪氨酸水合物/2-甲基-3-(3,4-二羥基苯基)-L-丙氨酸/3-(3,4-二羥基苯基)-2-甲基-L-丙氨酸/(-)-甲基多巴/(-)-3-(3,4-二羥基苯基)-2-甲基-L-丙氨酸/α-Methyl-L-DOPABR,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,41372-08-1RT
N-乙酰-L-亮氨酸/N-乙酰-L-白氨酸/N-乙?;?L-亮氨酸/N-Acetyl-L-LeucineBR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13515-93-0RT
熱帶利什曼原蟲PCR檢測試劑盒多少錢魚蛋白胨,250gNA 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
月示胨,250gEpmedin C 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
氰化高鐵血紅蛋白標準液,10ml1-METHYL-3-N-OCTYLIMIDAZOLIUM BROMIDE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
麥芽浸粉,250gNickel(II) chloride hexahydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
胎血清,100ml1,7-DIBROMOHEPTANE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
胎血清,500mlGADOLINIUM CHLORIDE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
胎血清(南美洲),100mlEthyl 3-bromopropionate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
胎血清(南美洲),500mlDIPHENYL(P-TOLYL)PHOSPHINE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
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