注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:肺炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣
英文名稱:MetaRTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
肺炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
對(duì)羥基苯丙酮酸/4-α-二羥基桂皮酸/4-α-二羥基肉桂酸/α-羥基對(duì)香豆酸/4-Hydroxyphenylpyruvic acidBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,156-39-8RT
2-丁酮酸/2-氧代丁酸/3-甲基丙酮酸/丙?;姿?2-酮丁酸/2-Ketobutyric acidBR,97%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,600-18-0RT
苦酮酸/4-硝基-3-甲基對(duì)硝基苯基-5-吡唑啉酮/3-甲基-4-硝基-1-(對(duì)硝基苯)-2-吡唑啉-5-酮/1-(對(duì)硝基苯)-3-甲基-4-硝基-5-吡唑啉酮/4-硝基-3-甲基-1-(對(duì)硝基苯)-5-吡唑啉酮/3-甲-4-硝-1-對(duì)硝苯-5-吡唑啉酮/Picrolonic acidCP,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,550-74-3RT
丙酮酸/乙酰甲酸/2-氧代丙酸/2-酮基丙酸/α-酮基丙酸/乙鹽甲酸/乙酰基甲酸/Pyruvic acidAR,98%250克國(guó)產(chǎn)127-17-32~8℃,避光
月桂酸/十二酸/正十二酸/十二烷酸/Lauric acidCP,98%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,143-07-7RT
反丁烯二酸/延胡索酸/富馬酸/紫堇酸/E)-2-丁烯二/反-1,2-乙烯二羥酸/1,2-乙烯二羧酸/(E)-2-丁烯二酸/TMEDACP,99%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,110-17-8RT
戊二酸/膠酸/1,3-丙烷二羧酸/A,γ-丙烷二羧酸/1,3-丙二羧酸/Glutaric acidCP,99%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,110-94-1RT
丁二酸/琥珀酸/亞乙基二羧酸/1,2-乙烷二甲酸/Succinic acidAR,99.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌, 110-15-6RT
丁二酸鈉六水合物/琥珀酸鈉/六水丁二酸二鈉/丁二酸二鈉鹽/琥珀酸二鈉鹽/Sodium succinate dibasic hexahydrateAR,99%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6106-21-4RT
丁二酸鈉/琥珀酸鈉/丁二酸二鈉/丁二酸二鈉鹽/琥珀酸二鈉鹽/Sodium succinate dibasicAR,99%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,150-90-3RT
丁二酸銨/琥珀酸銨/丁二酸二銨/琥珀酸二銨/Ammonium succinateAR,97%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌, 2226-88-2RT,避光
己二酸/1,6-己二酸/肥酸/己二酸酯/1,4-丁二羧酸/1,4-丁烷二羧酸/Adipic acidAR,99.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,124-04-9RT
壬二酸/杜鵑花酸/1,7-壬二酸/庚烷-1,7-二羥酸/王二酸/Azelaic acidAR,88%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌, 123-99-9RT
內(nèi)消旋-2,3-二溴丁二酸/2,3-二溴丁二酸/二溴丁二酸/α,β-二溴代琥珀酸/ MESO-2,3-二溴琥珀酸/間-2,3-二溴丁二酸/MESO-2,3-二溴丁二酸/meso-2,3-Dibromosuccinic高純,98%100克進(jìn)分608-36-6RT
肺炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣Vitamin E 質(zhì)量規(guī)格:UV≥97%,BR
LINDERANE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
2-(Trifluoromethyl)benzonitrile 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Thioanisole 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
TRIS(4-(1H,1H,2H,2H-PERFLUOROOCTYL)PHENYL)PHOSPHINE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
BENZO[E]PYRENE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Schisantherin A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
1-Hexyl-3-methylimidazolium chloride 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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