注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:副結(jié)核分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Mycobacterium paratuberculosisPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
副結(jié)核分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
硅油Ⅲ/苯甲基硅油274/甲基苯基硅油/45%苯基/甲基苯基硅油III/苯基甲基硅油III/聚硅氧烷/二甲聚硅氧烷/有機(jī)硅油/二甲基(硅氧烷與聚硅氧烷)/硅酮/有機(jī)硅樹(shù)脂/甲基硅樹(shù)脂/聚二甲基硅氧烷/硬泡硅油/Silicone色固100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,63148-62-9RT
甲基硅油/二甲基硅油/硅油/聚硅氧烷/二甲聚硅氧烷/有機(jī)硅油/二甲基(硅氧烷與聚硅氧烷)/硅酮/有機(jī)硅樹(shù)脂/甲基硅樹(shù)脂/聚二甲基硅氧烷/硬泡硅油/Dimethylsilicone fluidBR500毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,63148-62-9RT
甲基硅油DC200/硅酮OV-101/二甲基硅油/甲基硅油/二甲基硅酮液/聚硅氧烷DC-200/硅酮DC-200/甲基硅氧烷/聚二甲基硅氧烷/二甲基(硅氧烷與聚硅氧烷)/硅酮/有機(jī)硅樹(shù)脂/甲基硅樹(shù)脂/硬泡硅油/Dimethylsilicone fluidBR,粘度10 mPa.s250毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,63148-62-9RT
甲基硅油I/甲基硅油201-350/Methylsilicone oil I色固100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
碳酸鍶/菱鍶礦/Strontium carbonateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1633-05-2RT
硫酸鍶/天青石/大青石/鍶礦/Strontium sulfateAR500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,CAS:7759-02-6RT
草酸鍶/乙二酸鍶/Strontium oxalateAR,95%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,814-95-9RT
三氧化二鎳/黑色氧化鎳/氧化高鎳/氧化鎳/過(guò)氧化鎳/氧化鎳黑/Nickelic oxideCP,70%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1314-06-3RT
堿式碳酸鎳/碳酸鎳/[碳酸(2-)]四羥基三鎳/碳酸鎳氫氧化物/Nickel(II) carbonate basic tetrahydrateAR,44%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,12607-70-4RT
氟化鎳/二氟化鎳/氟化亞鎳/四水合氟化鎳(II)/Nickel(II) fluoride tetrahydrateCP,30%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13940-83-5RT
草酸鎳/乙二酸鎳/草酸鎳(II)二水合物/Nickel oxalate dihydrateBR,31%50克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6018-94-6RT
氧化鍺/二氧化鍺/氧化鍺(Ⅳ)/Germanium dioxide5N5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1310-53-8RT
氧化鉿/二氧化鉿/氧化鉿(IV)/Hafnium dioxideBR100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,12055-23-1RT
硫酸銦/硫酸銦(III)/Indium sulfateCP,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13464-82-9RT
副結(jié)核分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格Poly(styrene) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Lithium hydroxide 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
4-Amino-6-nitroresorcinol hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Sennoside D 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Methyl 2,4-dihydroxybenzoate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
3-CYCLOHEXYL-1-PROPYNE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
BISMUTH SULFATE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
PIEFELTARRAENIN A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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