微生物生長是細(xì)胞物質(zhì)有規(guī)律地.不可逆增加,導(dǎo)致細(xì)胞體積擴大的生物學(xué)過程,這是個體生長的定義。繁殖是微生物生長到一定階段,由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)制與重建并通過特定方式產(chǎn)生新的生命個體,即引起生命個體數(shù)量增加的生物學(xué)過程。微生物的個體生長特點是時間裉短,很快就進(jìn)入繁殖階段,生長與繁殖難以分開。因此,常常以群體生長作為細(xì)菌生長的指標(biāo),除有特定的目的以外.在微生物的研究和應(yīng)用中,只有群體的生長才有意義,而群體生長常常表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目或物質(zhì)的增加。對細(xì)胞物質(zhì)的增加可以用生物量來表示。對于單細(xì)胞微生物生長進(jìn)行測定時,既可取緬胞數(shù),也可選取細(xì)胞重量作為生長的指標(biāo);而對于多細(xì)胞,特別是絲狀真菌,則以菌絲生長的長度或菌絲的重量為生長指標(biāo)。微生物生長的測定主要有計繁殖數(shù)和測生長量等方法。
(1)計繁殖數(shù)
①顯微直接測數(shù)法適用于單細(xì)胞的微生物類群。測定時用細(xì)菌計數(shù)器或血細(xì)胞計數(shù)板(適用于酵母、真菌孢子等)在光學(xué)顯微鏡下直接觀察細(xì)胞并進(jìn)行計數(shù)。此法十分常用,但得到的數(shù)目是包括死細(xì)胞在內(nèi)的總菌數(shù)??捎锰厥馊玖蠈罹旧龠M(jìn)行顯微計數(shù),如細(xì)菌經(jīng)吖啶橙染色后,在紫外線顯微鏡下可觀察到細(xì)胞發(fā)出橙色熒光,而死細(xì)胞則發(fā)出綠色熒光,因此可用以區(qū)別活菌和死菌。
②平板菌落計數(shù)法 迄今zui廣泛采用的主要活菌計數(shù)方法,適用于各種好氧菌和厭氧菌,具體分為平板涂布法和傾注法。其主要操作是把稀釋后的一定量菌液通過澆注或涂布的方法,讓其內(nèi)的微生物單細(xì)胞一一分散在瓊脂平板上(內(nèi)),待培養(yǎng)后,每一活細(xì)胞就形成一個單菌落,即“菌落形成單位”(colony forming unit,cfu),根據(jù)皿上形成的cfu數(shù)去推算菌樣的含菌數(shù)。此法所得到的數(shù)值往往比直接法測定的數(shù)字小。另外,操作較繁瑣且要求操作者技術(shù)熟練,在混合微生物樣品中只能測定占優(yōu)勢并能在供試培養(yǎng)基上生長的類群。
(2)測生長量
①干重法直接測定生長量的較常用方法。收集單位體積培養(yǎng)液中菌體,以清水洗凈,然后在100℃左右烘干細(xì)胞或減壓干燥,稱重。由于重可知鮮重:細(xì)菌干重為鮮重的20%~25%,酵母干重為鮮重的15%~30%,絲狀真菌干重為鮮重的10%~15%。
②比濁法可使用光電比色計測定,通過測定菌懸液的光密度或透光率反映細(xì)胞的濃度.是測定懸液中細(xì)胞數(shù)的快速方法,一般選用450~650nm波段。因細(xì)胞濃度僅在一定范圍內(nèi)與光密度呈直線關(guān)系,因此待測菌懸液的細(xì)胞濃度不應(yīng)過低或過高.培養(yǎng)液的色調(diào)也不宜過深,顆粒性雜質(zhì)的數(shù)量應(yīng)盡量減少。要連續(xù)跟蹤某一培養(yǎng)物的生長動態(tài),可用帶有側(cè)臂的三角燒瓶做原位測定。
③生理指標(biāo)法 以代謝作用所消耗或產(chǎn)生的物質(zhì)的量表示微生物的生長量。如微生物對O2的吸收、產(chǎn)生CO2的量、發(fā)酵糖產(chǎn)酸量、測含氮量、測含碳量以及測磷、DNA、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)等,可以根據(jù)實驗?zāi)康暮蜅l件適當(dāng)選用,其應(yīng)用的前提是作為生長指標(biāo)的那些生理活動不受生長以外的其他因素影響。
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