傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

SRA01/04（HLE） 人晶體上皮細(xì)胞永生系

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人羊膜細(xì)胞;HA 兔載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 試劑盒 IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FEZ1： 腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體 小鼠肉瘤瘤株;S180 小鼠表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 兔誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISA 試劑盒 IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FAM29A： FAM29蛋白抗體 人前列腺上皮細(xì)胞RNAHPEpiC miRNA5 μg

SW-13細(xì)胞，人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞 豬細(xì)胞系(ST),ST細(xì)胞 CL-0422RBL-1(大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 兔抑瘤素M(OSM)ELISA 試劑盒 IgM/PE PE標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

NCI-H838(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 A9(皮下結(jié)締組織細(xì)胞) 大鼠五聚素3(PTX3)ELISA試劑盒 Apo-H(Mouse Apolipoprotein H)  小鼠載脂蛋白H 96T

MIC1： 結(jié)腸癌相關(guān)蛋白MIC1抗體 小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);MFC-B5-GFP

IL18 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-18 / IL-1F4 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A(W5A)ELISA試劑盒 IL1Ra  大鼠白介素1受體拮抗劑 96T

MHC Class II： 組織相容性復(fù)合體β抗體 CCL17 Others Mouse 小鼠 CCL17 / TARC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員4(W4)ELISA試劑盒 BAFF-R(Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor)  人B細(xì)胞活化因子受體 96T

SRA01/04（HLE）人晶體上皮細(xì)胞永生系HSH2D： HSH2D抗體 CM-R111大鼠雪旺氏細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

HEF細(xì)胞，人胚纖維細(xì)胞系 變形桿菌 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA (LH)ELISA 試劑盒 IL-14/Taxilin alpha 白介素14抗原 0.5mg

Hirudin： 水蛭素抗體 EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A5 人促紅細(xì)胞生成素抗原(EPO-Ag)ELISA試劑盒 IL-15(Interleukin-15) 白細(xì)胞介素-15抗原 0.5mg

HLA Class 1 ABC： 白細(xì)胞抗原A抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0927